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高效液相色譜儀流動相的選用要求
發布人:admin   發布時間:2022-06-29 14:46:44    【

高效液相色譜儀流動相的選用要求包括流動相性質要求、流動相選擇、流動相pH值、流動相脫氣、流動相過濾、流動相貯存、鹵代溶劑應特別注意的問題和HPLC用水等方面。

一、流動相脫氣:

1、流動相脫氣的原因:

HPLC所用流動相必須預先脫氣,否則容易在系統內逸出氣泡,影響泵工作、柱分離效率、檢測器靈敏度和基線穩定性,甚至無法檢測。

(1)流動相中的溶解氧可能與樣品、流動相甚至固定相(如烷基胺)反應。

(2)溶解氧會引起溶劑pH變化,給分析結果帶來誤差。

(3)溶解氧能與某些溶劑(如甲醇和四氫呋喃)形成有紫外吸收的絡合物,此絡合物會提高背景吸收(特別是在260nm以下),導致檢測靈敏度輕微降低,更重要的是在梯度洗脫時會造成基線漂移或形成鬼峰。除去溶解氧將大大提高UVD的性能。

(4)在熒光檢測中,溶解氧在一定條件下會引起淬滅現象,特別是對芳香烴、脂肪醛和酮等。在某些情況下,熒光響應可降低達95%。除去溶解氧將改善在一些熒光檢測中的靈敏度。

(5)在電化學檢測中(特別是還原電化學法),溶解氧的影響更大。

2、常用脫氣方法:

有吹氦脫氣法、加熱回留法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法和在線真空脫氣法等。

二、流動相過濾:

所有溶劑使用前都必須經0.45μm或0.22μm濾膜過濾,以除去雜質微粒。色譜純試劑也不例外,除非在標簽上標明已過濾。

用濾膜過濾時,要注意分清有機相(脂溶性)濾膜和水相(水溶性)濾膜。

有機相濾膜一般用于過濾有機溶劑,過濾水溶液時流速低或過濾不動。

水相濾膜只能用于過濾水溶液,嚴禁用于有機溶劑。否則濾膜會被溶解,溶有濾膜的溶劑不得用于HPLC。

對于混合流動相,可在混合前分別過濾。如需混合后過濾,首選有機相濾膜。現已有混合型濾膜。

三、流動相貯存:

流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內,不能貯存在塑料容器中。因為許多有機溶劑(如甲醇和乙酸等)可浸出塑料表面的增塑劑,導致溶劑被污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統,可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴,防止溶劑揮發引起組成變化,防止氧和二氧化碳溶入流動相。

磷酸鹽和乙酸鹽緩沖液很容易長霉,應盡量新鮮配制使用,不要貯存。如確需貯存,可在冰箱內冷藏,并在3天內使用,用前應重新過濾。

容器應定期清洗,特別是盛水、緩沖液和混合溶液的容器,以除去容器底部的雜質沉淀和可能生長的微生物。因甲醇有防腐作用,所以盛甲醇的容器無此現象。

四、鹵代溶劑應特別注意的問題:

1、鹵代溶劑可能含有微量的酸性雜質,能與HPLC系統中的不銹鋼反應。

2、鹵代溶劑與水的混合物比較容易反應,不能存放太久。

3、鹵代溶劑(如CCl4和CHCl3)等與各種醚類(如二異丙醚和四氫呋喃等)混合后,可能會反應生成一些對不銹鋼有較大腐蝕性的產物,這種混合流動相應盡量不采用或新鮮配制。

4、鹵代溶劑(如CH2Cl2)與一些反應性有機溶劑(如乙腈)混合靜置時,會產生結晶。

總之,鹵代溶劑zui好新鮮配制使用。如果是和干燥的飽和烷烴混合,則不會產生類似問題。

五、HPLC用水:

HPLC應用中要求用超純水,如檢測器基線的校正和反相柱的洗脫。


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